近日，國(guó)標(biāo)GB/T 27417-2017《合格評(píng)定 化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》發(fā)布，并將于2018年4月1日實(shí)施。

筆者對(duì)該規(guī)范進(jìn)行了初步總結(jié)，以幫助大家快速閱讀和了解該《化學(xué)分析方法確認(rèn)和驗(yàn)證指南》，以下是該標(biāo)準(zhǔn)的精簡(jiǎn)介紹和分析。

該國(guó)標(biāo)共有6個(gè)章節(jié)，分別是范圍、引用文件、定義、方法確認(rèn)要求、方法特性參數(shù)的確認(rèn)、方法驗(yàn)證要求。另外，該國(guó)標(biāo)還有3個(gè)附錄，分別是方法回收率偏差范圍、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)變異系數(shù)、重復(fù)性和再現(xiàn)性自由度對(duì)照表。

1 范圍

本標(biāo)準(zhǔn)給出了實(shí)驗(yàn)室對(duì)化學(xué)分析方法確認(rèn)和方法驗(yàn)證的一般性原則，并指出適用于實(shí)驗(yàn)室對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室制定的方法、超出預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法以及實(shí)驗(yàn)室對(duì)新引入的分析方法在正式使用前的方法驗(yàn)證。

2 規(guī)范性引用文件

參考了ISO/IEC 指南99:2007國(guó)際計(jì)量學(xué)詞匯-基本和通用概念及相關(guān)術(shù)語(yǔ)等文件。

3 術(shù)語(yǔ)和定義

本部分對(duì)常見(jiàn)的術(shù)語(yǔ)進(jìn)行了定義，包括：方法確認(rèn)、方法驗(yàn)證、實(shí)驗(yàn)室內(nèi)方法確認(rèn)、實(shí)驗(yàn)室間方法確認(rèn)、定性方法、定量方法、確證方法、篩選方法、容許限、檢出限、定量限、精密度、靈敏度、測(cè)量區(qū)間、自由度、準(zhǔn)確度等。

需要注意的是，該部分中“方法確認(rèn)”對(duì)應(yīng)的英文是“method validation”，而“方法驗(yàn)證”對(duì)應(yīng)的英文是“method verification”，大家在閱讀時(shí)還應(yīng)注意這些和行業(yè)內(nèi)的常見(jiàn)定義是否有區(qū)別。

4 方法確認(rèn)要求

4.1 總則

實(shí)驗(yàn)室應(yīng)對(duì)非標(biāo)準(zhǔn)方法、實(shí)驗(yàn)室制定方法、超出其預(yù)定范圍使用的標(biāo)準(zhǔn)方法、擴(kuò)充和修改過(guò)的標(biāo)準(zhǔn)方法的確認(rèn)制定程序。對(duì)于確認(rèn)過(guò)的方法，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)制定作業(yè)指導(dǎo)書(shū)。

4.2 確認(rèn)方法的特定參數(shù)

實(shí)驗(yàn)室可在綜合考慮成本、風(fēng)險(xiǎn)和技術(shù)可行性基礎(chǔ)上，并根據(jù)預(yù)期的用途來(lái)進(jìn)行方法確認(rèn)。實(shí)驗(yàn)室進(jìn)行方法確認(rèn)的內(nèi)容應(yīng)完整，包括但不限于以下方法特性：

a) 方法的選擇性;

b) 方法適用范圍;

c) 檢出限和/或定量限;

d) 測(cè)量范圍和/或線(xiàn)性范圍;

e) 精密度(重復(fù)性和/或再現(xiàn)性);

f) 穩(wěn)健度;

g) 正確度;

h) 準(zhǔn)確度;(注：測(cè)量結(jié)果的準(zhǔn)確度由正確度和精密度兩個(gè)指標(biāo)進(jìn)行表征。)

i) 靈敏度;

j) 結(jié)果的測(cè)量不確定度。

4.3 確認(rèn)方法特性參數(shù)的選擇

4.3.1 方法確認(rèn)的典型特性參數(shù)

方法確認(rèn)首先應(yīng)明確檢測(cè)對(duì)象特定的需求，包括樣品的特性、數(shù)量等，并應(yīng)滿(mǎn)足客戶(hù)的特殊需要，同時(shí)應(yīng)根據(jù)方法的預(yù)定用途，選擇需要確認(rèn)的方法特征參數(shù)。

典型方法確認(rèn)參數(shù)的選擇，參見(jiàn)表1：

4.3.2 實(shí)驗(yàn)室內(nèi)方法確認(rèn)

通常情況下，需要確認(rèn)的技術(shù)參數(shù)包括方法的選擇性、檢出限、定量限、線(xiàn)性范圍、正確度、精密度和穩(wěn)健度等。

4.3.3 實(shí)驗(yàn)室間方法確認(rèn)

通常情況下，對(duì)于定性方法，至少應(yīng)確認(rèn)方法的檢出限和選擇性;對(duì)于定量方法，至少應(yīng)確認(rèn)方法的適用對(duì)象、線(xiàn)性范圍、定量限和精密度。

5 方法特性參數(shù)的確認(rèn)

5.1 選擇性

分析方法應(yīng)具有一定的選擇性。

5.2 測(cè)量范圍

方法的測(cè)量范圍通常應(yīng)滿(mǎn)足以下條件：

a) 方法的測(cè)量范圍應(yīng)覆蓋方法的最低濃度水平(定量限)和關(guān)注濃度水平;

b) 至少需要確認(rèn)方法測(cè)量范圍的最低濃度水平(定量限)、關(guān)注濃度水平和最高濃度水平的正確度和精密度，必要時(shí)可增加確認(rèn)濃度水平。

c) 若方法的測(cè)量范圍呈線(xiàn)性，還應(yīng)滿(mǎn)足5.3條款的要求。

5.3 線(xiàn)性范圍

線(xiàn)性范圍應(yīng)盡量滿(mǎn)足如下標(biāo)準(zhǔn)：

a) 采用校準(zhǔn)曲線(xiàn)法定量，并至少具有6個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)(包括空白)，濃度范圍盡可能覆蓋一個(gè)或多個(gè)數(shù)量級(jí)，每個(gè)校準(zhǔn)點(diǎn)至少隨機(jī)順序重復(fù)測(cè)量2次，最好是3次或更多;對(duì)于篩選方法，線(xiàn)性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不低于0.98;對(duì)于準(zhǔn)確定量的方法，線(xiàn)性回歸方程的相關(guān)系數(shù)不低于0.99.

b) 校準(zhǔn)用的標(biāo)準(zhǔn)點(diǎn)應(yīng)盡可能均勻地分布在關(guān)注的濃度范圍并能覆蓋該范圍?

c) 濃度范圍一般應(yīng)覆蓋關(guān)注濃度的50%~150%，如需做空白時(shí)，則應(yīng)覆蓋關(guān)注濃度的0%~150%。

d) 應(yīng)充分考慮可能的基質(zhì)效應(yīng)影響，排除其對(duì)校準(zhǔn)曲線(xiàn)的干擾。

5.4 檢出限和定量限

5.4.1 需要評(píng)估檢出限(LOD)和定量限(LOQ)的情況

通常情況下，只有當(dāng)目標(biāo)分析物的含量接近于“零”的情況下或者檢測(cè)濃度接近檢出限和定量限時(shí)，才需要確定方法的LOD或LOQ。

5.4.2 檢出限(LOD)

對(duì)于多數(shù)現(xiàn)代分析方法來(lái)說(shuō)，LOD可分為兩個(gè)部分，即儀器檢出限(IDL)和分析方法檢出限(MDL)。應(yīng)注意兩者的區(qū)別，在該國(guó)標(biāo)中指出：使用信噪比可用來(lái)考察儀器性能，但不適用于評(píng)估方法的檢出限。

確定檢出限的方法：

在該國(guó)標(biāo)中提到了多種確定檢出限的方法，包括：

a) 目視評(píng)價(jià)法評(píng)估LOD

目視評(píng)價(jià)法是通過(guò)在樣品空白中添加已知濃度的分析物，然后確定能夠可靠檢測(cè)出分析物最低濃度值的方法。即在樣品空白中加入一系列不同濃度的分析物，隨機(jī)對(duì)每一個(gè)濃度點(diǎn)進(jìn)行約7次獨(dú)立測(cè)試，通過(guò)繪制陽(yáng)性(或陰性)結(jié)果百分比與濃度相對(duì)應(yīng)的反應(yīng)曲線(xiàn)確定閾值濃度。該方法也可用于定性方法中檢出限的確定。

b) 空白標(biāo)準(zhǔn)偏差法評(píng)估LOD

即通過(guò)分析大量的樣品空白或加入最低可接受濃度的樣品空白來(lái)確定LOD。獨(dú)立測(cè)試的次數(shù)應(yīng)不少于10次(n≥10)，計(jì)算出檢測(cè)結(jié)果的標(biāo)準(zhǔn)偏差，具體的計(jì)算方法可參考該國(guó)標(biāo)。

5.4.3 定量限(LOQ)

與檢出限相類(lèi)似，定量限也分為儀器定量限和分析方法定量限。

5.5 正確度

測(cè)量結(jié)果的正確度用于表述無(wú)窮多次重復(fù)性測(cè)定結(jié)果的平均值與參考值之間的接近程度，測(cè)量結(jié)果的偏倚則通過(guò)回收率實(shí)驗(yàn)進(jìn)行評(píng)估。

5.6 精密度

該國(guó)標(biāo)中對(duì)精密度的描述分別從重復(fù)性、再現(xiàn)性?xún)蓚€(gè)維度進(jìn)行描述。

5.7 穩(wěn)健度

穩(wěn)健度可通過(guò)由實(shí)驗(yàn)室引入預(yù)先設(shè)計(jì)好的微小的合理變化因素，并分析其影響而得出?？蓪?duì)樣品進(jìn)行預(yù)處理、凈化、分析等可能影響檢測(cè)結(jié)果的方面進(jìn)行預(yù)實(shí)驗(yàn)，并分析可能影響結(jié)果的因素，必要時(shí)進(jìn)行正交試驗(yàn)設(shè)計(jì)進(jìn)行穩(wěn)健度試驗(yàn)。

5.8 測(cè)量不確定度

該國(guó)標(biāo)中列舉了可能影響不確定度的多方面因素，并對(duì)測(cè)量不確定度評(píng)估時(shí)的考慮要點(diǎn)進(jìn)行了介紹

6 方法驗(yàn)證要求

對(duì)分析方法的驗(yàn)證提出總體要求，包括定量分析和定性分析。在驗(yàn)證總則中提到，當(dāng)化學(xué)分析實(shí)驗(yàn)室引入標(biāo)準(zhǔn)方法時(shí)，實(shí)驗(yàn)室應(yīng)根據(jù)該國(guó)標(biāo)的相應(yīng)要求進(jìn)行驗(yàn)證，即證實(shí)該方法能在該實(shí)驗(yàn)室現(xiàn)有的設(shè)施設(shè)備、人員、環(huán)境等條件下獲得令人滿(mǎn)意的結(jié)果。